شمارش گلبولهای قرمز
( RED Blood Cell Count (RBC
لوازم مورد نیاز:
لام1-لام هموسیتومتر(بهتر است نئوبار باشد) يا توما Thoma
2 - لامل سنگین
3- پیپت ملانژورقرمز که درحباب آن یک مهره قرمز وجود دارد .(red bead in the bulb )این پیپت برای رقیق کردن خون بکار میرود
4- لوله لاستیکی (مکنده) لوله لاستیکی حدود2۰سانتیمتر
ازبالا لام هموسیتومترجهت شمارش سلولهای خون
ملانژور قرمز جهت شمارش گلبولهای قرمز
ملانژور سفید جهت شمارش گلبولهای سفید
پیپت مخصوص جهت اندازگیری هموگلوبین
5- ماده رقیق کننده.محلول رقیق کننده باید تازه به تازه تهیه شود 6- میکروسکپروی پیپت ملانژور قرمز درجات 5/. و 1 و 101 قرار دارد طرزرقیق کردن خون: یک ملانژوربا( مهره قرمز) تمیز وخشک انتخاب می کنیملوله لاستیکی رابه ته ملانژور وصل میکنیم .
لوله نمونه گيري حاوي نمونه خون راجهت مخلوط شدن چند بار بصورت دوراني يا چرخشي حركت ميدهيم تا خوب مخلوط شود .
سر دیگر لوله لاستيكي را دردهان میگذاریمنوک ملانژور را داخل خون میگذاریم. ملانژور را افقی نگه میداریم
خون را تا علامت نيم 5/. داخل ملانژورمی کشیم خون نوک واطراف ملانژور را با پنبه خوب پاک می کنیم اگر خون از علامت نيم بالاتر رفت با تماس نوك انگشت خود به انتهاي ملانژور خون را تا علامت نيم پايين مي اوريم از كاغذ صافي ويا ساير مواد جاذب استفاده نميكنيم چون با اين عمل پلاسما خارج و سلولها باقي ميماند يعني خون غليظ ميشود
ازورودحباب هوا به داخل ملانژور جلوگیری به عمل می آوریمبرای اینکه تمام محلول آلوده نشود.قبلا چند سی سی از محلول رقیق کننده را دریک بشر کوچک میریزیم.نوک ملانژور را داخل محلول قرار میدهیم
ماده رقیق کننده را تا101 به درون ملانژور میکشیم لوله لاستیکی رااز ملانژور جدا می کنیم. سر وته ملانژور رابین دو انگشت شست وسبابه نگه می داریم.به مدت یک دقیقه محتوی ملانژور را به شدت تكان ميدهيم تا مخلوط شود.سپس ملانژور را بمدت ۵ دقیقه روی شیکر(ویبراتور) يا دستگاه تكاندهنده الكتريكي قرار میدهیم.توجه ! اگر بعد از این مدت محتوی ملانژوربلافاصله برای شمارش مورد استفاده قرارنگیرد مخلوط کردن مجدد قبل از استفاده ضروری است
لام هموسیتومترتمیز را روی میزصاف و تراز قرار میدهیم لامل سنگین تمیز را از كنار روی لام طوري قرار میدهیم كه هوا مابين لام و لامل نرود به اينترتيب اگر لام را اندكي هم خم كنيم لامل از روي ان نمي افتد .
ملانژور راعمودی می گیریم 4تا5قطره اول محتوی ملانژور را دور میریزیم با گذاشتن انگشت سبابه در ته ملانژور ریختن محتوی ملانژور را در اختیار میگیریم.
یک قطره کوچک از محتوی ملانژور را توسط قراردادن نوک ملانژوردر
بین لام ولامل هدایت میکنیم.بطوریکه مخلوط خون وماده رقیق کننده به منطقه شمارش نفوذ کند. دقت كنيد كه محفظه شمارش كاملا پر شده و حباب هوادر ان ايجاد نشود ودر اين حالت مايع به داخل حفره جريان نمييابد به محض پرشدن محفظه پيپت را از ان دور كنيد اگر ماده به درون شیارها نفوذ کند بایدلام را شسته خشک کرده مجددا مورد استفاده قرار میدهیم.
چند دقیقه لام را ثابت میگذاریم تاسلولها بی حرکت شوند.لام را زیر میکروسکوپ قرار میدهیم بعد منطقه شمارش را در مركز ديد قرار ميدهيم بطوريكه قسمتي از ان كه با علامت R در شكل مشخص شده است وداراي 16 مربع كوچك است در وسط قرار گيرد ابتدا با ابژكتيو داراي قدرت كم يعني دوسوم تصوير را ميزان و واضح ميكنيم و بعد به ابژكتيو داراي قدرت زياد تغيير ميدهيم تا مربعي كه خود به 16 مربع ديگر تقسيم شده است در زمينه ديد واضح و مشخص گردد. با عدسی ابژکتیو 10مورد مطالعه قرار میدهیم در اين زمان مربع مركزي واقع بين 9 مربع ديگر را در وسط ميدان ميكروسكوپي ميبينيم
با عدسي 40 گلبولهاي قرمز موجود در 5 مربع از 25 مربع مركزي را شمارش ميكنيم هريك از ابعاد اين مربعها با سه خط موازي مشخص شده اند
شمارش را از سمت چپ رديف بالايي يعني چهار مربع كوچك به سمت راست شروع ميكنيم و بعد از سمت راست به چپ خانه هاي رديف پايين تر را ميشماريم
تعداد گلبولهاي قرمز در يك ميليمتر مكعب خون ميشود مجموع تعداد گلبولهاي قرمز شمارش شده در 5 مربع كوچك R ضربدر عدد 10000.
پي پت هاي شمارش سلولهاي خوني را توسط اب گرم كه با فشار از داخل ان رد ميشود ميشورند وبراي خشك كردن از محلول استون و سپس هوا استفاده ميكنند ويا در اتو يا اون خشك ميكنند
هیچ نظری موجود نیست:
ارسال یک نظر
لطفا در صورت امكان نظر ارزشمندتان را درج فرمايند